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若所提质粒拷贝数较低或大于10 kb的大质粒，可加大菌体使用量，同时按照比例增加Buffer P1、Buffer P2、Buffer N3的用量保证菌体可以被完全裂解，洗脱缓冲液Buffer EB应在65℃-70 ℃水浴锅预热，同时在吸附和洗脱时可以适当地延长时间，以增加提取效率。

（1）质粒拷贝数：载体因拷贝数差异会造成质粒产量明显的波动。高拷贝数的载体常有2-3倍的产量波动，（每毫升培养过夜的菌液，高拷贝数的质粒载体产量为3-16 μg）。长片段质粒和表达型载体常以中低拷贝数为主，每毫升菌液的产量约为0.5~2 μg；

◇低拷贝质粒：pBR322, pACYC 及其衍生载体，pSC101 及其衍生载体，SuperCos, pWE15；

◇高拷贝质粒：pTZ, pUC, pBS, pGM-T；

（2）菌种问题：菌种保存过程中存在质粒丢失现象，培养细菌前最好先划线活化，以稳定产量；

（3） 细菌未充分裂解：细菌须在Buffer P1/RNase A 中充分重悬，成团的细菌因无法裂解会降低产量；

（4） 试剂准备有误：Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀析出，需37℃水浴几分钟至清亮方可使用（请勿剧烈晃动Buffer P2）；Buffer PW加入乙醇体积不准确（使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇）；

（5）将Buffer EB预热至65℃-70 ℃，并重复二次洗脱；

（6）培养时间过长或在 2-8℃保存时间过长会明显降低产量，建议使用新鲜的菌液。

37℃水浴混匀至澄清后使用，请勿剧烈晃动Buffer P2。

加入Buffer P2后应温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA。此

步骤所用时间应不超过5分钟，避免质粒受到破坏。

导致RNA污染，需补加RNase A至Buffer P1（终浓度100 μg/mL），混匀后2-8℃保存。

可以，该试剂盒提取的质粒纯度满足转化、酶切、PCR等需求。

乙醇残留。Buffer PW 洗涤后应尽量离心去除残留的液体，待硅胶膜完全干燥后再加入洗脱缓冲液。

不可以，因为酵母是真菌，细胞壁比大肠杆菌（细菌）的更厚，因此使用CW0500M更难裂解，建议使用Yeast Plasmid Mini Kit（CW0509S）提取

可以。最好按照标准存放。

（1）储存温度不当或超出有效期：已加入RNase A的Buffer P1长时间室温放置可能会出现酶活下降，使用后应及时放回2 ~ 8℃。

（2）菌液体积过高：由于菌体数量过多，导致Buffer P1中RNase A不足以消化菌体中的RNA，建议减少菌液体积进行实验。

本试剂盒未包含去内毒素步骤，提取产物可能影响转染效率。如需进行细胞转染实验，建议选用专门去内毒素的EndoFree Plasmid Mini Kit（CW2106S）进行DNA提取。

可以使用水从离心柱中洗脱 DNA。为了达到最佳洗脱效率，请确保水为无核酸酶（nuclease-free）且 pH 值在 7-8.5 之间。如果需长期保存 DNA，建议使用试剂盒提供的 DNA 洗脱缓冲液。

在质粒条带上方出现的拖尾现象可能表明质粒提取物中存在基因组DNA污染。虽然这种情况并不常见，但基因组DNA可能在裂解过程中被剪切并与质粒共同纯化。加入Buffer P2后剧烈摇晃或涡旋可能会产生断裂的基因组DNA，应避免这种情况。如果裂解液非常粘稠且混合不均匀，建议减少小提实验使用的细胞起始量。

A260/280比值通过比较核酸最大吸收峰260nm与蛋白质最大吸收峰280nm的吸光度值，可评估所洗脱DNA的相对纯度。若中和反应不充分或洗涤步骤不完全，可能导致过量蛋白质残留在基质中并与DNA共同洗脱。

培养基成分和某些细胞成分会降低A260/A230比值。按照实验方案操作可确保去除这些污染物。此外，某些颗粒物可能与DNA一起洗脱，从而影响该比值。若出现这种情况，可在分光光度计（如Nanodrop^®）检测前对洗脱的DNA进行额外15秒离心以沉淀颗粒物。